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离子交换层析分离两性化合物的原理介绍如下：
离子交换层析法（ionexchangechromatography，简称IEC）是从复杂的混合物中 ，分离性质相似大分子的方法之一 ，依据的原理是物质的酸碱性、极性，也就是所带阴阳离子的不同 。电荷不同的物质 ，对管柱上的离子交换剂有不同的亲和力 ，改变冲洗液的离子强度和pH值，物质就能依次从层析柱中分离出来 。
离子交换层析法大致分为5个步骤：
1.离子扩散到树脂表面。
2.离子通过树脂扩散到交换位置 。
3.在交换位置进行离子交换；被交换的分子所带电荷愈多 ，它与树脂的结合愈紧密 ，也就愈不容易被其它离子取代 。
4.被交换的离子扩散到树脂表面。
5.冲洗液通过，被交换的离子扩散到外部溶液中 。
离子交换树脂的交换反应是可逆的 ，遵循化学平衡的规律 ，定量的混合物通过管柱时，离子不断被交换，浓度逐渐降低 ，几乎全部都能被吸附在树脂上；在冲洗的过程中 ，由于连续添加新的交换溶液，所以会朝正反应方向移动 ，因而可以把树脂上的离子冲洗下来 。
如果被纯化的物质是氨基酸类的分子 ，则分子上的净电荷取决于氨基酸的等电点和溶液的pH值，所以当溶液的pH值较低 ，氨基酸分子带正电荷 ，它将结合到强酸性的阳离子交换树脂上；随着通过的缓冲液pH逐渐增加，氨基酸将逐渐失去正电荷 ，结合力减弱 ，最后被洗下来。
由于不同的氨基酸等电点不同，这些氨基酸将依次被洗出 ，最先被洗出的是酸性氨基酸 ，如aparticacid和glutamicacid（在约pH3~4时），随后是中性氨基酸，如glycine和alanine 。碱性氨基酸如arginine和lysine在pH值很高的缓冲液中仍带有正电荷 ，因此这些在约pH值高达10~11时才出现 。
一 、目的
学习用阳离子交换树脂柱分离氦基酸的操作方法和基本原理.
二 、原理
各种氨基酸分子的结构不同,在同一PH时与离子交换树脂的亲和力有差异,因此可依亲和力从小到大的顺序被洗脱液洗脱下来,达到分离的效果.
三、器材
1 、20cmX 1cm层析管 2 、试管
3、吸管． 4 、恒压洗脱瓶
5 、部分收集器 6、搪磁杯
7 、电炉 8 、分光光度计
四、试剂和材料
1 、．苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸 lx 8,l00一200目,可用上海华东化工学院产品）
2 、2 mol／L盐酸溶液
3、2mol／L氢氧化钠溶液
4、标准氨基酸溶液 天冬氨酸 、赖氨酸和组氨酸均配制成 2 mg／mL的0.1M盐酸溶液.
5 、混合氢基酸溶液将上述天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸溶液按1：2．5：10的比例混合.
6 、柠檬酸－氢氧化钠一盐酸冲液（pH5.8）,钠离子浓度0 .45M）
取柠檬酸（C6O7H8.H20 ）14.25g 、氢氧化钠9.30g和 浓盐酸 5．25 mL溶于少量水后,定容至 500 mL,冰箱保存.
7、显色剂 2 g水合茚三酮溶于 75mL乙二醇单甲醚中．加水至 100 mL.
8 、50%乙醇水溶液
五 、操作
1、层析柱的准备：将强酸型阳离子交换树脂用氢氧化钠处理成Na+型后洗至中性（处理方法见第三篇实验十二）．搅拌一小时后装成一个直径1cm．高 16～18 cm的层析柱.
2 、氨基酸的洗脱：用P H5.8的柠檬酸缓冲液流洗平衡交换住（装置如图）.调节流速为 0.5 mL／min,流出液达床体积的4倍时即可上样.由柱上端仔细加人氨基酸混合液0．25—0．5 mL,同时开始收集流出液.当样品液弯月面靠近树脂顶端时,即刻加入0.5 mL拧檬酸缓冲液冲洗加样品处.待缓冲液弯月面靠近树脂顶端时.再加入0．5 mL缓冲液.如此重复两次,然后用滴管小心注入柠檬酸缓冲液（切勿搅动床面）,并将柱与洗脱瓶和部分收集器相连.开始用试管收集洗脱液,每管收集lmL．共收集60一80管.
3 、氨基酸的鉴定：向各管收集液中加lmL水合茚三酮显色剂并混匀,在沸水浴中淮确加热15分钟后冷却至室温．再加15 mL的50％乙醇液.放置10分钟.以收集液第2管为空白,测定A570nm波长的光吸收值.以光吸收值为纵坐标,以柱洗脱体积为横坐标绘制洗脱曲线.以已知3种氨基酸的纯溶液为样品,按上述方法和条件分别操作,将得到的洗脱曲线与混合氨基酸的洗脱曲线对照．可确定3个峰的大致位置及各蜂为何种氨基酸.
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